[의약바이오 취업캠프] - Day8(1)
드디어 금요일... 이번주의 마지막 날 시작!
<오늘의 교육>
1. 분광광도계(spectrophotometer) 기기실습
원리: 특정 물체는 빛이 물체에 부딪혔을 때 고유의 구조 때문에 특정 파장의 빛을 흡수하거나 투과한다. 분광광도계를 통해 물질 고유의 투과도와 흡광도를 알 수 있다.
더 나아가, Beer의 법칙으로 화합물 고유의 몰흡광계수와 흡광도의 관계를 통해 미지 시료의 농도도 구할 수 있다. 이때는 다른 농도를 가진 표준물질들로 검정곡선을 만들어 이용한다.
방법
1. 메틸오렌지, 브릴리언트 블루, 지표물질(geniposide)를 각각 D.W.에 1mg/ml로 희석해 sample을 준비한다.
2. 큐벳에 blank로 사용할 D.W.를 넣고 큐벳을 분광광도계에 넣은 후 작동시킨다. (빛이 통하는 투명한 옆면의 방향을 맞춰서 넣어준다. 이 부분은 손으로 만지지 않는다.)
3. 1에서 만든 샘플들을 1ml씩 큐벳에 넣고 기기를 작동시킨다.
브릴리언트 블루는 파란색에 가까워 짧은 파장을 반사하고, 나머지 긴 파장을 흡수한다.
반대로 메틸 오랜지는 긴 파장을 반사하고, 짧은 파장을 흡수한다.
색소를 검출할 때는 플라스틱 큐벳을 사용해 400nm 보다 짧은 파장이 통과되지 않아 이 영역은 실제로 검출할 수 없지만, 기기상에는 저렇게 나온다고 한다.
geniposide는 색이 없어 석영 큐벳을 이용하여 찍었다.
2. HPLC 데이터 분석 - 어제 두번째로 실시한 HPLC 데이터를 확인했다.
10분에서 20분 사이에 나오는 peak가 geniposide이다. 확실히 저번보다는 피크가 높다.
희석을 EtOH로 했을 때와 DMSO로 했을 때의 데이터를 따로 보면 더 놀랍다.
확실히 DMSO로 희석한 샘플들이 geniposide를 더 특이적으로 검출한 모습이다. 따라서 DMSO 희석 샘플들로 검정 곡선을 그려 농도를 확인했다.
검정곡선의 R제곱 값이 1이 나와 신뢰도가 매우 높다. geniposide의 농도는 D.W.로 추출한 샘플이 더 높게 나왔음을 알 수 있었다.
3. cell subculture
1/10 농도로 subculture 해주었다.
4. 미생물 시험배지 만들기 - TSA 배지와 SDA 배지
미생물 한도 시험, 무균시험 등을 위한 고체 배지를 만들었다.
고체 배지를 직접 만든 후, 이 배지가 여러 미생물 시험에 적합한지 검증하는 배지성능 시험을 할 예정이다.
방법
1. 각각의 TSA , SDA 배지 분말을 각각 40, 65g/L로 D.W.에 녹여 800ml, 400ml를 만든다.
2. auto clave에 넣고 돌린다.
3. 식으면 플레이트에 넣고 굳힌다.
5. NO assay
어제 cell treat로 LPS 처리를 한 cell이 생성한 NO의 양을 확인한다.
Griess reagent 처리를 하고, ELISA reader로 흡광도를 측정한다.
Day8(2)에서 계속...