[의약바이오 취업캠프] - Day9

어느덧 교육이 3주차에 접어들었다.

<오늘의 교육>
1. 분광광도계(spectrophotometer) 기기실습 - EtOH 정량

원리: 크로뮴산과 에탄올은 1:1로 반응한다. 이때 산화/환원 반응이 일어나 무색의 크로뮴산은 청록색의 크로뮴으로 변한다. 이는 가시광선 영역에서 흡광도를 측정할 수 있다는 것을 의미한다. 이미 알고 있는 농도의 에탄올을 크로뮴산과 반응시켜 standard 샘플을 만들어 standard curve를 만들고, 그것을 바탕으로 미지 에탄올 시료의 농도를 구한다.

방법
1. 10, 15, 20, 25% 에탄올 용액과 미지시료를 각각 1ml씩 50ml 튜브에 담는다.
2. 각각의 튜브에 10ml의 크로뮴산 용액을 넣고 20분간 잘 흔들어서 섞어준다.
3. 피펫으로 위의 용액 1ml씩 새로운 15ml 튜브에 넣고 10ml의 증류수를 넣어준다.
4. 분광광도계를 이용하여 각 용액의 흡광도를 측정(basic mode - absorbance 600nm 설정 - 큐벳에 D.W. 1ml 넣고 blank 측정)하고, 각각의 용액을 큐벳에 1ml 씩 넣고 흡광도를 측정한다.

이렇게 흡광도가 표시된다.

5. 측정한 에탄올 용액 흡광도에 대한 검정 곡선을 그린다.

결과는 다음과 같다.

미지 시료의 흡광도가 0.236인데 농도가 10% 보다 낮다는 것에서 부터 뭔가 잘못되었음을 알 수 있다. 검정곡선의 신뢰도도 낮아서 결과적으로는 신뢰성이 떨어진다고 할 수 있다.

2. cell seeding - MTT, NO assay
두 번째 MTT와 NO assay를 위한 cell seeding을 해줬다.
방법은 기존과 같고, 농도와 볼륨은 다음과 같다.

3. 직무 교육 - 에이프로젠, 배양
배양 직무에서는 무엇을 하는지 설명해주셨다.
일단 크게 배양 공정 관련 업무와 배양 하지 않을 때의 업무가 구분된다.

배양 전/후
1. qualification(적격성 평가) 2. SOP 제정 및 개정 3. CIP,COP(clean in/out place) 4. 청소(room청소, 주로 외주)

배양
1. CIP,COP(CHT, DHT에 맞춰서 계획, QC와 같이 검증)
2. Line assambly
3. Autoclaving
4. SIP(ESIP/ISIP, 설치 장비 스팀으로 멸균)
5. Media prep
6. cell culture(Thawing - seed culture - main culture - harvest) - IPC(In Process Control - 배양액을 확인해 용존산소량, 삼투압, 구성성분의 비율, pH, cell의 농도 등을 확인할 수 있다.)
7. FIT(필터 완전성 시험)
8. Harvesting

배양 업무에서 가장 신경써야 할 부분은 사람에 의한 오염이다. 특히 에이프로젠은 perfusion 배양 방식이어서 작은 scale에서 많은 target protein을 생산할 수 있지만 오염에 취약하다고 한다. 일단 오염이 확인되면 그동안 배양된 cell은 전부 폐기되고, 후속 조치도 까다롭다고 하니 업무를 수행할 때도 신경을 많이 써야 한다고 한다.

배양 업무에 대해 조금 더 알 수 있는 시간이어서 유익했다.

<소감>
cell seeding이랑 농도 계산은 도움없이 혼자 할 수 있을 정도로 익숙해진 것 같다. 오늘은 직무 교육까지 시간이 남았었는데 너무 피곤해서 나도 모르게 잠깐 잠들어 버렸다. 실험들이 익숙해지니 남는 시간들이 생기는데 내일부터는 챙겨온 적성 검사 문제집을 시간을 마냥 허비하지 말고 풀어봐야겠다.

이번 주가 끝나면 교육이 거의 끝난 것과 다름이 없다. 지난 시간을 돌아보면 분명 아는 것도 많아졌고, 정보도 많이 얻었다. 이젠 내가 이것들을 잘 활용하는 일만 남은 것 같다. 몸도 마음도 지치고 얼른 끝났으면 좋겠다는 생각도 들었지만 마지막까지 잘 마무리 해보고 싶다. 화이팅이다.