코끼리의 여행

교육 마지막 주가 다가왔다. 1.HPLC 실습 - 비타민 C 정량분석 이번엔 비타민 C이다. 준비물 전개액(50mM KH2PO4 : ACN = 6 : 4), Ascrobic acid, Metaphosphoric acid, 비타민 C tablet, 막자사발 세트, 0.45㎛ 필터 방법 1. Ascrobic acid 20mg을 5% Metaphosphoric acid 10ml에 녹인다. (2mg/ml) 2. 3,000rpm, 10분간 원심분리 후 상등액을 취해서 새 tube에 옮긴다. 3. 5% Metaphosphoric acid를 사용해 5, 10, 20㎍/ml로 희석한다. 4. 비타민 C tablet 1정을 막자사발을 이용해 빻은 뒤 10% Metaphosphoric acid 10ml로 녹인다. 5. 이..

1. 대한민국 약전 실습 대한민국 약전에 있는 공정서를 기준으로 의약품의 성상을 확인하고, 확인시험과 함량시험을 통해 의약품의 품질을 관리하는 실습을 했다. 품질관리 기록서와 시험일지를 직접 작성해보는 시간을 가졌다. 시험대상 제품은 1) 점안액(아이리스 플러스 점안액), 2) 필름 코팅 정제(에스 알비디 정) 두 가지이다. - 품질관리 기록서 구성: 개정 번호(역추적이 가능하도록), 제조단위(한 번에 생산하는 의약품의 양), 제조번호, 제조일자, 시험의뢰일, 시험의뢰 번호, 접수일자, 시험 번호, 검체 채취장소, 검체 채취일, 검체 채취량, 검체 체취자, 작성일자, 작성자, 승인자 등의 기본 사항을 적게 되어있다. 이때 원본과 사본을 구분하기 위해 파란색 볼펜으로 작성한다. 품질관리 기록서의 첫 장은 ..

1. HPLC 실습 - 아세트아미노펜 정량 지난 시간에 TLC, spectrophotometer에 이은 아세트아미노펜 검출로 이번엔 HPLC를 이용했다. 이동상은 D.W. : 메탄올 = 3 : 1 용액을 사용했다. 검액으로는 각 조마다 아세트아미노펜을 standard로 2.5, 5, 10㎍/ml의 농도로 만들고, 펜잘 큐, 타이레놀, 타나센 정은 각 10㎍/ml의 농도로 이동상에 녹여 준비했다. 이후 1.5ml/min의 유속으로 진행하며 243nm에서 관찰했다. 2. DPPH assay DPPH assay는 항산화능 즉, 활성산소(free radical)를 얼마나 제거할 수 있는지 측정하기 위해 수행한다. 활성산소는 몸속의 산소가 산화과정에 이용되어 여러 대사과정에서 생성된다. 활성산소는 생체조직을 공격..

드디어 금요일... 이번주의 마지막 날 시작! 1. 분광광도계(spectrophotometer) 기기실습 원리: 특정 물체는 빛이 물체에 부딪혔을 때 고유의 구조 때문에 특정 파장의 빛을 흡수하거나 투과한다. 분광광도계를 통해 물질 고유의 투과도와 흡광도를 알 수 있다. 더 나아가, Beer의 법칙으로 화합물 고유의 몰흡광계수와 흡광도의 관계를 통해 미지 시료의 농도도 구할 수 있다. 이때는 다른 농도를 가진 표준물질들로 검정곡선을 만들어 이용한다. 방법 1. 메틸오렌지, 브릴리언트 블루, 지표물질(geniposide)를 각각 D.W.에 1mg/ml로 희석해 sample을 준비한다. 2. 큐벳에 blank로 사용할 D.W.를 넣고 큐벳을 분광광도계에 넣은 후 작동시킨다. (빛이 통하는 투명한 옆면의 방향..

일주일 중 가장 힘들다는 목요일... 7일차 시작 1. TLC - 박막크로마토그래피를 이용해 아세트아미노펜 표준품과 시중의 3가지 의약품(펜잘Q, 타이레놀, 타나센)의 아세트아미노펜을 정량, 정성한다. 방법 1. 이동상(디클로로메탄:메탄올 = 4:1) 100ml 제조 후 유리 밀폐용기에 넣고 뚜껑을 덮는다. 2. TLC 판 하단부로부터 1cm 떨어진 부분을 연필로 직선 표시한 다음 직선을 1.5cm 간격으로 점을 찍어 나눈다.(여기에 sample 이름을 표시한다.) 그리고 하단부로부터 11cm 떨어진 부분에 연필로 표시한다. 3. 아세트아미노펜과 의약품 샘플(정량 후 메탄올로 1mg/ml으로 녹임)을 1.5ml tube에 20㎕씩 넣고 파스퇴르 파이펫을 이용해 찍어 놓은 점에 한 방울 넣고 드라이어로 완..

어느 덧 5일차 날씨도 제법 선선해졌다. 1. HPLC 결과 확인 - 어제 작동시킨 HPLC의 결과를 확인했다. 결과는 다음과 같다. 50분 이후부터는 기울기 비율을 초기 비율로 reset하고 안정화하는 구간이므로 특정 물질을 검출했다고 할 수 없다. 빨간색으로 표시된 부분이 target인 geniposide이다. 이 부분을 가지고 검정 곡선을 만들어 농도를 구했다. 추출물의 geniposide 농도를 구해보니 4.52%, 4.57%가 나왔다. 최소 2.9%는 나와야 정상이라고 하니 농도는 정상적으로 나온 셈이다. 하지만, 두 가지 문제가 있었다. 1. 피크가 너무 낮게 나왔다는 문제점이 있다. > standard의 농도를 높게 하고, 천연물을 기존에 1000배, 2000배에서 500, 250배로 조정한..

실습 2주차가 시작되었다. 1. HPLC - 2조 추출물 지표물질 함량 확인 다음의 조건으로 HPLC를 작동시켰다. 1. 전개액(1% acetic acid in D.W.과 1% acetic acid in ACN)을 만들어 sonication해서 준비한다. 2. standard인 geniposide sample을 x100, x200, x400배 희석해 10㎍/ml, 5㎍/ml 2.5㎍/ml으로 농도를 맞춘다. 3. 추출물 sample(D.W.와 에탄올 추출물)을 에탄올로 각각 x1000, x2000배 희석한다. 4. 2,3의 결과물들을 10㎕씩 HPLC vial에 옮겨준다. 5. HPLC 기기의 펌프 관을 닦고 1에서 만든 solvent로 교체한다.(선을 손으로 잡으면 안되고, 선이 solvent의 바닥에..

3일 차 실습수업이자 이번 주의 마지막 수업이었다. 1. 어제 Cell 배양한 거 현미경으로 확인 – 배양이 잘 되는 중이다. 7-80% 정도 찬 것 같다. 2. HPLC – 어제 실시한 크로마토그램 확인, 데이터로 그래프 그리기 Postrun analysis program으로부터 텍스트 파일을 export 하여 저장하고, 엑셀로 옮긴 후 차트로 나타내었다. 1. HPLC software에서 실행 결과인 텍스트 파일을 export 하고, 저장한다. 2. 엑셀을 실행하고, 한쪽에 날짜, 분석물질, 파장, 용매 등의 기본 정보를 적어놓는다. 3. 엑셀에서 [파일] - [열기] 에서 다운받은 텍스트 파일을 연다.(마법사 뜨는 거 다 마침 누른다.) 4. 여러 개의 시트가 열리는데 각각의 시트에서 LC chro..

말로만, 책으로만 보고 듣던 HPLC라는 녀석을 직접 본 날이다. 3. HPLC 교육 및 실습 - 아데닌과 카페인 분리하기 대작전 (1) 시약과 샘플 준비하기 - 전개액(D.W.: 메탄올 = 6: 4), 3mM 아데닌(100ml), 50mM 카페인(100ml), 커피 용액(50mg/ml) 방법 1) D.W. 600ml, 메탄올 400ml 정량해서 플라스크에 1L 전개액을 만든다. 2) 아데닌 3mM 용액을 전개액을 사용해 30γM 농도로 희석한다. > 100배 희석 [전개액 (1ml-10γl) + 아데닌 3mM 용액(10γl)] 3) 카페인 50mM 용액을 전개액을 사용해 25, 50, 100γM 농도로 희석한다. > 500배 희석 [전개액 (10ml-20γl) + 카페인 50mM 용액(20γl)] 후 ..