코끼리의 여행

어느덧 교육이 3주차에 접어들었다. 1. 분광광도계(spectrophotometer) 기기실습 - EtOH 정량 원리: 크로뮴산과 에탄올은 1:1로 반응한다. 이때 산화/환원 반응이 일어나 무색의 크로뮴산은 청록색의 크로뮴으로 변한다. 이는 가시광선 영역에서 흡광도를 측정할 수 있다는 것을 의미한다. 이미 알고 있는 농도의 에탄올을 크로뮴산과 반응시켜 standard 샘플을 만들어 standard curve를 만들고, 그것을 바탕으로 미지 에탄올 시료의 농도를 구한다. 방법 1. 10, 15, 20, 25% 에탄올 용액과 미지시료를 각각 1ml씩 50ml 튜브에 담는다. 2. 각각의 튜브에 10ml의 크로뮴산 용액을 넣고 20분간 잘 흔들어서 섞어준다. 3. 피펫으로 위의 용액 1ml씩 새로운 15ml ..

6일차. 시작! 1. Cell seeding - 항염 효능 평가를 위한 cell seeding 항염 효능 평가는 LPS로 NO 생성을 유도한 후, drug를 처리해서 얼마나 NO 생성을 억제하는지 확인한다. 96 well plate에 지표물질과 천연물 2개를 각각 test한다. 목표 농도는 5x10^5 cell/well = 5x10^6 cell/ml이다 => M’ 사용할 양은 각 well 당 100㎕이고, 60개의 well을 사용하므로 6ml 필요하지만 넉넉하게 10ml로 잡았다. => V’ 현재 cell의 농도와 얼마를 사용할 지 정하기 위해 MV=M’V’식을 이용한다. 방법 자체는 MTT를 위한 cell seeding과 비슷하지만, 이번엔 cell 농도가 더 높다. 1. subculture한 세포를 ..

실습 2주차가 시작되었다. 1. HPLC - 2조 추출물 지표물질 함량 확인 다음의 조건으로 HPLC를 작동시켰다. 1. 전개액(1% acetic acid in D.W.과 1% acetic acid in ACN)을 만들어 sonication해서 준비한다. 2. standard인 geniposide sample을 x100, x200, x400배 희석해 10㎍/ml, 5㎍/ml 2.5㎍/ml으로 농도를 맞춘다. 3. 추출물 sample(D.W.와 에탄올 추출물)을 에탄올로 각각 x1000, x2000배 희석한다. 4. 2,3의 결과물들을 10㎕씩 HPLC vial에 옮겨준다. 5. HPLC 기기의 펌프 관을 닦고 1에서 만든 solvent로 교체한다.(선을 손으로 잡으면 안되고, 선이 solvent의 바닥에..